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提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA
2016-09-19 10:55:54 來源:提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA
實驗目的研磨破碎軟骨組織(大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨),提取其總RNA。實驗原理充分磨碎軟骨樣品(大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨),再用相關(guān)試劑提取其總RNA。實驗材料和器具樣品:大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨儀器:多樣品組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-24)耗材:研磨罐(上海凈信,***ml),研磨珠(上海凈信,***mm,***顆)試劑:液氮若干實驗步驟1.研磨軟骨組織1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織,剪切成約***立方厘米小塊;1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中***分鐘或放入***度冰箱冷凍30分鐘;1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中,蓋好蓋子;1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,放入已經(jīng)在***度冰箱預冷好的適配器中,加入變性液,β-巰基乙醇;1.5 將適配器放入凈信研磨儀中,在***hz條件下,研磨***min,可得到勻漿狀的軟骨組織;2.總RNA提取2.1 冰水浴下,加酸性水飽和酚,搖勻,加醋酸鈉,氯仿、異戊醇混合液,冰水浴上***min;2.2 ***℃下,離心,取上清液,加氯仿、異戊醇混合液,離心取上清,加異丙醇,***℃下沉淀,離心,得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,加無RNA酶水,溶解得膠狀溶液;2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀,即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液。實驗結(jié)果采用本實驗方法提取的動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高,并且純度高、質(zhì)量、完整性好,可以滿足分子生物學研究應用。
總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果
Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果
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